Principio de Elisa
Las pruebas del VIH más comunes utilizan la sangre para detectar la infección por el VIH. El ensayo inmunoenzimático (ELISA) analiza una muestra de sangre del paciente para detectar anticuerpos. El fluido oral (no la saliva), recogido de las mejillas y las encías, también puede utilizarse para realizar una prueba ELISA. Las pruebas ELISA de fluido oral se consideran tan sensibles como un análisis de sangre. También se puede utilizar una muestra de orina durante una prueba ELISA, pero se considera menos precisa que una prueba de sangre o de fluido oral. Un ELISA positivo (reactivo) para todas las muestras debe utilizarse con una prueba de seguimiento (confirmatoria), como la prueba de Western blot, para hacer un diagnóstico positivo. Aunque los resultados falsos negativos o falsos positivos son extremadamente raros, pueden ocurrir si el paciente aún no ha desarrollado anticuerpos contra el VIH o si se cometió un error en el laboratorio. Cuando se utilizan en combinación con la prueba confirmatoria de Western blot, las pruebas ELISA tienen una precisión del 99,9%.
Los ensayos clínicos son estudios de investigación que evalúan un nuevo enfoque médico, dispositivo, medicamento u otro tratamiento. Como paciente de Stanford Health Care, usted puede tener acceso a los últimos y avanzados ensayos clínicos.
Técnica de laboratorio Elisa
El ensayo inmunoenzimático (ELISA) es un ensayo inmunológico comúnmente utilizado para medir anticuerpos, antígenos, proteínas y glicoproteínas en muestras biológicas. Algunos ejemplos son: el diagnóstico de la infección por VIH, las pruebas de embarazo y la medición de citoquinas o receptores solubles en el sobrenadante celular o en el suero. Los ensayos ELISA se realizan generalmente en placas de 96 pocillos, lo que permite medir múltiples muestras en un solo experimento. Estas placas deben ser placas absorbentes especiales (por ejemplo, placas NUNC Immuno) para garantizar que el anticuerpo o el antígeno se adhieran a la superficie. Cada ELISA mide un antígeno específico, y los kits para una variedad de antígenos están ampliamente disponibles.
El ELISA representado en la figura 1 es lo que se conoce como ELISA en sándwich, en el que se utilizan dos conjuntos de anticuerpos para detectar productos secretados, por ejemplo, citoquinas. El método se realiza por pasos en el orden indicado. El primer paso es recubrir la placa ELISA con el anticuerpo de captura, cualquier exceso de anticuerpo no unido se lava de la placa. El anticuerpo de captura es un anticuerpo criado contra el antígeno de interés.
Elisa indirecta en sándwich
Los anticuerpos se producen en respuesta a la infección, por lo que las pruebas ELISA de anticuerpos pueden indicar si un animal ha estado o no en contacto con un determinado virus. Una prueba ELISA de antígenos puede indicar si un animal está infectado por un virus detectándolo directamente.
Para un ELISA de anticuerpos, los antígenos se pegan en una superficie de plástico, se añade una muestra y los anticuerpos de la enfermedad que estamos analizando se unirán a los antígenos. A continuación, se añade un segundo anticuerpo con un marcador y se detecta una reacción positiva porque el marcador cambia de color cuando se añade un sustrato adecuado. Si no hay anticuerpos en la muestra, el segundo anticuerpo no podrá adherirse y no habrá cambio de color.
En el caso de un ELISA de antígeno, los anticuerpos se unen a una superficie de plástico, se añade una muestra y si los antígenos del virus que estamos analizando están presentes, se pegarán a los anticuerpos. Esta prueba procede entonces de la misma manera que la prueba ELISA de anticuerpos.
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Elisa directa
El ensayo inmunoenzimático (ELISA) (/ɪˈlaɪzə/, /ˌiːˈlaɪzə/) es un ensayo bioquímico analítico de uso común, descrito por primera vez por Eva Engvall y Peter Perlmann en 1971. [1] El ensayo utiliza un tipo de inmunoensayo enzimático (EIA) en fase sólida para detectar la presencia de un ligando (comúnmente una proteína) en una muestra líquida utilizando anticuerpos dirigidos contra la proteína a medir. El ELISA se ha utilizado como herramienta de diagnóstico en medicina, fitopatología y biotecnología, así como para el control de calidad en diversas industrias.
En la forma más sencilla de un ELISA, los antígenos de la muestra a analizar se adhieren a una superficie. A continuación, se aplica sobre la superficie un anticuerpo correspondiente para que se una al antígeno. Este anticuerpo se une a una enzima y luego se eliminan los anticuerpos no unidos. En el último paso, se añade una sustancia que contiene el sustrato de la enzima. Si se ha producido la unión, la reacción posterior produce una señal detectable, normalmente un cambio de color.
La realización de un ELISA implica al menos un anticuerpo con especificidad para un antígeno concreto. La muestra con una cantidad desconocida de antígeno se inmoviliza en un soporte sólido (normalmente una placa de microtitulación de poliestireno), ya sea de forma no específica (mediante adsorción a la superficie) o específica (mediante la captura por parte de otro anticuerpo específico para el mismo antígeno, en un ELISA «sándwich»). Una vez inmovilizado el antígeno, se añade el anticuerpo de detección, que forma un complejo con el antígeno. El anticuerpo de detección puede estar unido covalentemente a una enzima o puede ser detectado por un anticuerpo secundario unido a una enzima mediante bioconjugación. Entre cada paso, la placa suele lavarse con una solución de detergente suave para eliminar cualquier proteína o anticuerpo que esté unido de forma no específica. Tras el último paso de lavado, la placa se revela añadiendo un sustrato enzimático para producir una señal visible, que indica la cantidad de antígeno en la muestra.
